Real-time pcr là gì? Các công bố khoa học về Real-time pcr
Real-time PCR (Polymerase Chain Reaction) là một kỹ thuật trong di truyền phân tử để mở rộng một vài mẫu DNA hoặc RNA thành các bản sao nhiều lần để phân tích v...
Real-time PCR (Polymerase Chain Reaction) là một kỹ thuật trong di truyền phân tử để mở rộng một vài mẫu DNA hoặc RNA thành các bản sao nhiều lần để phân tích và phát hiện sự hiện diện của một chất di truyền cụ thể. Kỹ thuật này hoạt động bằng cách sử dụng các hợp chất quang học hoặc quang học để ngừng lại (stop) quá trình PCR để đo lường quá trình mở rộng DNA trong thời gian thực. Điều này cho phép người sử dụng quan sát quá trình diễn ra và đo lường lượng chất di truyền cụ thể có mặt trong mẫu. Real-time PCR được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu sinh học, y học và kiểm tra di truyền.
Real-time PCR, còn được gọi là qPCR (Quantitative PCR), là một phương pháp quan trọng trong di truyền phân tử để phát hiện và đo lường lượng chất di truyền cụ thể trong một mẫu. Nó mang đến sự cải tiến so với PCR thông thường bằng cách cung cấp thông tin về số lượng chất di truyền có mặt trong một mẫu sử dụng trong suốt quá trình PCR.
Quá trình Real-time PCR được thực hiện bằng cách sử dụng một bộ phận quang học được gắn với thiết bị PCR để đo lường liên tục sự gia tăng của sản phẩm PCR trong thời gian thực. Điều này giúp người sử dụng quan sát và đánh giá độ tăng của DNA trong quá trình PCR.
Có hai phương pháp chính để theo dõi và đo lường sự gia tăng DNA trong Real-time PCR:
1. Dye-based detection: Loại phổ biến nhất của phương pháp này là sử dụng các chất fluorescent dựa trên Sybr Green hoặc EvaGreen. Các chất này có khả năng đóng kín với DNA khi nó được sao chép trong quá trình PCR. Khi chất dừng lại liên kết với DNA, chúng phát ra tín hiệu fluorescent. Mức độ phát quang của tín hiệu này tương ứng với lượng DNA đã được sao chép. Điều này cho phép người sử dụng xác định số lượng chất di truyền có mặt trong mẫu ban đầu.
2. Probe-based detection: Phương pháp này sử dụng các đầu dò tương tác với một vùng mục tiêu cụ thể trên DNA hoặc RNA trong quá trình PCR. Đầu dò trong phương pháp này bao gồm fluorophore (dye truyền tín hiệu) và quencher (chất khử tín hiệu). Khi đầu dò tương tác với vùng mục tiêu, chúng bị tách ra và phát quang. Sự phát quang này phụ thuộc vào lượng chất di truyền mà đầu dò phát hiện đã kết hợp với. Thông qua đo lường tín hiệu phát quang, người sử dụng có thể xác định số lượng chất di truyền trong mẫu.
Real-time PCR có nhiều ứng dụng trong nghiên cứu sinh học và y học, bao gồm chuẩn đoán các bệnh di truyền, kiểm tra vi khuẩn và virus, xác định sự hiện diện của gen cụ thể, theo dõi biểu hiện gen và đo lường lượng gen trong mẫu nghiên cứu.
Danh sách công bố khoa học về chủ đề "real-time pcr":
Bối cảnh: Hiện nay, vẫn chưa có sự thống nhất về cách thực hiện và diễn giải các thí nghiệm PCR định lượng thời gian thực (qPCR) tốt nhất. Vấn đề càng trở nên trầm trọng hơn do thiếu chi tiết thí nghiệm đầy đủ trong nhiều ấn phẩm, gây cản trở khả năng đánh giá phê bình chất lượng của các kết quả được trình bày hoặc thực hiện lại các thí nghiệm.
Nội dung: Hướng dẫn về Thông tin Tối thiểu cho Công bố Các Thí nghiệm PCR Thời gian thực Định lượng (MIQE) nhằm vào độ tin cậy của kết quả để giúp đảm bảo tính toàn vẹn của tài liệu khoa học, thúc đẩy sự nhất quán giữa các phòng thí nghiệm, và tăng cường tính minh bạch của thí nghiệm. MIQE là một tập hợp các hướng dẫn mô tả thông tin tối thiểu cần thiết cho việc đánh giá các thí nghiệm qPCR. Bao gồm là một danh sách kiểm tra đi kèm với sự gửi ban đầu của một bản thảo đến nhà xuất bản. Bằng cách cung cấp tất cả các điều kiện thí nghiệm và đặc điểm thử nghiệm liên quan, những người đánh giá có thể đánh giá tính hợp lệ của các giao thức đã sử dụng. Cần phải tiết lộ đầy đủ tất cả các thuốc thử, trình tự, và phương pháp phân tích để các nhà nghiên cứu khác có thể tái tạo kết quả. Chi tiết MIQE nên được công bố dưới dạng rút gọn hoặc như một phụ lục trực tuyến.
Tóm tắt: Việc tuân theo các hướng dẫn này sẽ khuyến khích thực hành thí nghiệm tốt hơn, cho phép diễn giải kết quả qPCR đáng tin cậy và rõ ràng hơn.
Trong bối cảnh dịch bùng phát liên tục của coronavirus mới xuất hiện gần đây (2019-nCoV), các phòng thí nghiệm y tế công cộng đang gặp phải thách thức do chưa có được các mẫu virus cách ly, trong khi ngày càng có nhiều bằng chứng cho thấy dịch bệnh lan rộng hơn so với dự đoán ban đầu và sự lây lan quốc tế qua khách du lịch đang xảy ra.
Chúng tôi đặt mục tiêu phát triển và triển khai một phương pháp chẩn đoán mạnh mẽ để sử dụng trong môi trường phòng thí nghiệm y tế công cộng mà không cần có sẵn mẫu virus thực tế.
Chúng tôi trình bày một quy trình chẩn đoán được xác thực cho 2019-nCoV, với thiết kế dựa trên quan hệ gen gần gũi của 2019-nCoV với coronavirus SARS, tận dụng công nghệ axit nucleic tổng hợp.
Quy trình này phát hiện chính xác 2019-nCoV và phân biệt 2019-nCoV với SARS-CoV. Thông qua sự phối hợp giữa các phòng thí nghiệm học thuật và công lập, chúng tôi đã xác nhận tính độc quyền của kết quả thử nghiệm dựa trên 297 mẫu lâm sàng gốc có chứa đầy đủ phổ virus đường hô hấp ở người. Vật liệu kiểm soát được cung cấp thông qua European Virus Archive – Global (EVAg), một dự án cơ sở hạ tầng của Liên minh Châu Âu.
Nghiên cứu hiện tại chứng minh năng lực phản ứng mạnh mẽ đạt được thông qua sự phối hợp giữa các phòng thí nghiệm học thuật và công lập trong các mạng lưới nghiên cứu quốc gia và châu Âu.
Bình thường hóa chính xác là điều kiện tiên quyết tuyệt đối để đo lường đúng biểu hiện gene. Đối với PCR sao chép ngược định lượng thời gian thực (RT-PCR), chiến lược bình thường hóa phổ biến nhất bao gồm tiêu chuẩn hóa một gene kiểm soát được biểu hiện liên tục. Tuy nhiên, trong những năm gần đây, đã trở nên rõ ràng rằng không có gene nào được biểu hiện liên tục ở tất cả các loại tế bào và dưới mọi điều kiện thí nghiệm, ngụ ý rằng sự ổn định biểu hiện của gene kiểm soát dự kiến phải được xác minh trước mỗi thí nghiệm. Chúng tôi đã trình bày một chiến lược mới, sáng tạo và mạnh mẽ để xác định các gene được biểu hiện ổn định trong một tập hợp các gene ứng cử viên để bình thường hóa. Chiến lược này bắt nguồn từ một mô hình toán học về biểu hiện gene cho phép ước lượng không chỉ sự biến đổi tổng thể của các gene nghị biểu bình thường mà còn sự biến đổi giữa các nhóm mẫu bộ của tập hợp mẫu. Đáng chú ý, chiến lược này cung cấp một thước đo trực tiếp cho sự biến đổi biểu hiện ước tính, cho phép người dùng đánh giá lỗi hệ thống được tạo ra khi sử dụng gene này. Trong một so sánh trực tiếp với một chiến lược đã được công bố trước đó, cách tiếp cận dựa trên mô hình của chúng tôi có hiệu suất mạnh mẽ hơn và ít nhạy cảm hơn đối với điều chỉnh đồng biến của các gene bình thường hóa ứng cử viên. Chúng tôi đã sử dụng chiến lược dựa trên mô hình để xác định các gene phù hợp để bình thường hóa dữ liệu RT-PCR định lượng từ ung thư ruột kết và ung thư bàng quang. Các gene này bao gồm UBC, GAPD, và TPT1 cho ruột kết và HSPCB, TEGT, và ATP5B cho bàng quang. Chiến lược được trình bày có thể được áp dụng để đánh giá độ thích hợp của bất kỳ ứng cử viên gene bình thường hóa trong bất kỳ loại thiết kế thí nghiệm nào và nên cho phép bình thường hóa dữ liệu RT-PCR đáng tin cậy hơn.
Chúng tôi đã phát triển một phương pháp PCR định lượng "thời gian thực" mới. Phương pháp này đo sự tích lũy của sản phẩm PCR qua một đầu dò fluorogenic gắn nhãn kép (tức là, đầu dò TaqMan). Phương pháp này cung cấp phép đo định lượng số lượng bản sao gene rất chính xác và nghiêm ngặt. Không giống như các phương pháp PCR định lượng khác, PCR thời gian thực không yêu cầu xử lý mẫu sau PCR, ngăn ngừa sự lây nhiễm tiềm ẩn qua lại của sản phẩm PCR và dẫn đến các xét nghiệm nhanh hơn và hiệu suất cao hơn. Phương pháp PCR định lượng thời gian thực có một phạm vi động rất lớn trong việc xác định phân tử mục tiêu bắt đầu (ít nhất là năm bậc độ lớn). PCR định lượng thời gian thực cực kỳ chính xác và ít tốn công sức hơn các phương pháp PCR định lượng hiện tại.
Phương pháp PCR Ngược Dòng Thời gian Thực dựa trên huỳnh quang (RT-PCR) được sử dụng rộng rãi để định lượng mức mRNA ở trạng thái ổn định và là một công cụ quan trọng cho nghiên cứu cơ bản, y học phân tử và công nghệ sinh học. Các thử nghiệm dễ tiến hành, có khả năng xử lý khối lượng lớn, và có thể kết hợp độ nhạy cao với độ đặc hiệu đáng tin cậy. Công nghệ này đang tiến hóa nhanh chóng với sự xuất hiện của các enzym, hóa chất và thiết bị mới. Tuy nhiên, mặc dù RT-PCR thời gian thực đã giải quyết nhiều khó khăn vốn có trong RT-PCR thông thường, nó đã trở nên ngày càng rõ ràng rằng nó tạo ra những vấn đề mới cần giải quyết cấp thiết. Do đó, bên cạnh việc cung cấp bức tranh tổng thể về công nghệ RT-PCR thời gian thực, bài đánh giá này còn có mục tiêu bổ sung: sẽ mô tả và thảo luận cụ thể một số vấn đề liên quan đến việc giải thích các kết quả có tính chất số học và dễ dàng phân tích thống kê, nhưng độ chính xác của chúng bị ảnh hưởng đáng kể bởi sự biến đổi của hóa chất và người điều hành.
- 1
- 2
- 3
- 4
- 5
- 6
- 10